時(shí)間分辨熒光免疫層析原理

熒光納米微球:

與經(jīng)典的時(shí)間分辨熒光免疫分析方法DELFIA法不同，時(shí)間分辨熒光免疫層析技術(shù)采用熒光納米微球作為標(biāo)記物，每個(gè)微球中可包裹成千上萬(wàn)個(gè)熒光分子，大大提高了標(biāo)記效率，有效的提高了靈敏度；同時(shí)納米熒光微球表面修飾有合適密度的羧基，用于與蛋白或抗體的共價(jià)偶聯(lián)，提高標(biāo)記物的穩(wěn)定性。

 

時(shí)間分辨熒光免疫層析原理:

當(dāng)將含有待測(cè)抗原（抗體）的樣品滴在加樣區(qū)，待測(cè)樣品中的抗原（抗體）與結(jié)合墊中的熒光納米微球標(biāo)記的抗體（抗原）結(jié)合并通過(guò)毛細(xì)作用向前層析，當(dāng)達(dá)到檢測(cè)區(qū)后，與檢測(cè)線上固定的抗體（抗原）結(jié)合，形成微粒-抗體-抗原-抗體夾心復(fù)合物并被固定在檢測(cè)線上，而多余的熒光微球標(biāo)記物繼續(xù)向前層析，與固定在質(zhì)控線二抗結(jié)合。反應(yīng)結(jié)束后，用紫外光源（340nm）對(duì)檢測(cè)區(qū)掃描檢測(cè)，檢測(cè)線和質(zhì)控線上熒光納米微球發(fā)出高強(qiáng)度的熒光（615nm），且衰變時(shí)間也較長(zhǎng)。利用延緩測(cè)量時(shí)間，待樣品基質(zhì)中自然發(fā)生的短壽命熒光（1-10ns）全部衰變后，再測(cè)量稀土元素的特異性熒光，這樣就可以*排除特異本底熒光的干擾。通過(guò)檢測(cè)線和質(zhì)控線熒光強(qiáng)度的強(qiáng)弱及其比值，即可分析出樣品中待測(cè)物的濃度。

 

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